pcr反应体系中Mg的作用(mg离子在pcr中浓度的作用)

mg离子在pcr中浓度的作用

PCR实验中的Mg2+是指镁离子，一般在反应缓冲液中均含有镁离子，镁离子与聚合酶结合降低聚合反应的活化能，可以调节镁离子浓度获得最理想的反应条件。

Mg在PCR中作用

一）试剂PCR仪

1.引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生物都有自己特异的引物。

2.耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。

3.10×PCR缓冲液：500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl（pH8.4,20℃）150mmol/L MgCl2,1mg/ml明胶。10×PCR缓冲液随酶一起购买。

4.5mmol/L dNTP贮备液：将dATP、dCTP、dGTP和dTTP钠盐各100mg合并，加入灭菌去离子水溶解，用NaOH调pH至中性，分装每份300μl，-20℃保存。dNTP浓度用UV吸收法测定。现用dNTP溶液均有商品化产品。

5.DNA模板：用处理液将待测标本处理，不同处理方法、操作各异，但目的是暴露标本中被检测的DNA。

mg离子在pcr中浓度的作用是什么

退火温度较低，可以提高2到3度Mg离子浓度一般的PCR在1.5mM就可以了，不知楼主用的多少，模板浓度较高或者含有其他PCR抑制剂，建议稀释下模板，延伸时间一般1kb/min，时间太短可能会延伸不完全，循环数太高也可能引起拖带，考虑平台期，30－35循环应该足够了

mg2+在pcr反应中的作用

PCR反应进行的基本条件：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。

扩展资料：

PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的英文缩写，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

mgcl2在pcr中的作用

Mgcl2的作用主要是促进核酸骨架的形成，影响聚合酶的4活性。Mgcl2浓度过高会降低扩增特异性，浓度过低影响扩增产量。

pcr mg2+浓度

模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶： 1、一般普通的酶，DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的 2、高效一点的酶，几ng也可以扩增出来的。

1、PCR反应步骤：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成 2、PCR反应五要素：①引物（Primer）、②酶 （Taq DNA Polymerase） 、③dNTP（dATP, dGTP, dCTP, dTTP）、④模板（Template）、⑤Mg2+（Magnesium） 3、引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。　 4、酶及其浓度：目前有两种Taq DNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。5、模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀； 蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。6、PCR扩增条件包括温度、时间和循环次数。

mg对pcr的影响

10×buffer 2.5ul； MgSO4，1.5ul； Taq 1ul； 10uM上下游引物 各1ul 模板 1ul 补水至25 MgSO4是可以调整的，taq得根据你的单位浓度，引物也要看浓度一般终浓度至0.1-1uM，模板也需视你模板质量和浓度调整。

pcr加mg离子

Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用 并能影响Polymerase的活性，一般的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整，同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度

Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。