page电泳缓冲液的作用(sds page电泳缓冲液)

sds page电泳缓冲液

一般在用缓冲液或者超声粉碎细胞后，得到的溶液都要高速离心（10000 g）10分钟，以去除不可溶的物质，这样在跑SDS-PAGE的时候不会出现拖带。

page胶电泳液

SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种用于根据蛋白质混合物的大小分离其成分的分析方法。

该技术基于这样的原理，即带电分子将在电场中朝具有相反符号的电极迁移。常规电泳技术不能用于确定生物分子的分子量，因为物质在凝胶中的迁移率取决于电荷和大小。

为了克服这个问题，需要对生物样品进行处理，以使其获得均匀的电荷，然后电泳迁移率主要取决于尺寸。对于这种具有不同形状和大小的蛋白质分子，需要进行变性（在SDS的帮助下完成），以使蛋白质失去二级，三级或四级结构。被SDS覆盖的蛋白质带负电，并在上样时凝胶并置于电场中，它将朝着阳极（带正电的电极）迁移，并通过基于分子筛分作用的大小分开。通过染色（蛋白质特异性）技术进行可视化后，可以通过将蛋白质的迁移距离与已知分子量阶梯（标记）的迁移距离进行比较来计算蛋白质的大小。

PAGE电泳凝胶中各成分的作用

首先准备一套蛋白电泳设备，蛋白质样品和marker上样到凝胶孔中，设置电压，启动电泳程序。

通常样本中会添加一种还原剂，如巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)(在洗涤剂的存在下，如SDS），可以打开折叠蛋白质的二硫键；而样本中加入的SDS洗涤剂可以给所有蛋白质加上负电荷，从而将它们线性化成多肽。

聚丙烯酰胺则是多肽电泳分离的介质。多肽在电场的作用下向阳极方向泳动。

PAGE缓冲液

蛋白质电泳前,需用样品缓冲液处理,样品缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将蛋白质分子中的S-S（二硫键）还原.电泳样品制备时加热,就是为了加速这些组分与蛋白质的反应.

page电泳技术原理

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。

操作步骤

1、凝胶制备：

用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。

2、上样：

分别取样品若干ml于离心管中，按1/1～1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3～5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30μl不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2～3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1～2cm时，即可停止电泳。

3、染色：

电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。

page凝胶电泳原理

sds：变性剂，用来变性蛋白和破坏蛋白二级结构。

AB：凝胶前体

AP和TEMED用来聚合凝胶。

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的英文缩写是sds-page