灭菌时的过高温度常对培养基造成不良影响。如:
1.出现混浊和沉淀(天然培养基成分加热沉淀出大分子多肽聚合物;培养基中Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Sb等阳性离子与培养基中的可溶性磷酸盐共热沉淀)。
2.营养成份破坏或改变(酸度较高时淀粉、庶糖、乳糖或琼脂灭菌过程易水解;pH7.5,0.1MPa灭菌20min,葡萄糖破坏20%,麦芽糖破坏50%,若培养基中有磷酸盐共存,葡萄糖转变成酮糖类物质,培养液由淡黄色变成红褐色,破坏更为严重。
3.pH7.2时培养基中的葡萄糖、蛋白胨、磷酸盐在0.1MPa灭菌15min以上可产生对微生物生长的某种抑制物。
4.高压蒸汽灭菌后培养基pH下降0.1--0.3。
5.高压蒸汽灭菌的过程会增加冷凝水,降低培养基成份浓度。对于前三种不良影响,可采用低压灭菌(如在0.056MPa、30min灭菌葡萄糖溶液),或将培养基几种成份分别灭菌,临用前无菌混合(如磷酸盐与Ca、Mg、Fe、Zn、Cu等阳性离子溶液)的方法,特殊情况可采用间歇灭菌、过滤除菌(如维生素溶液)。工业发酵中采用的连续加压灭菌法(135--140摄氏度,5--15s)和连续蒸煮法。
内源调节:由于微生物生长繁殖过程中产生的代谢产物,如有机酸会改变培养基原有的pH值,如不适当加以调节,则会抑制或者杀死菌体。
在培养基配制时应考虑其pH值的调节能力,通过培养基内在成分发挥的调节作用,称为pH的内源调节,如采用磷酸缓冲液的方法,可以使培养基中的酸性物质或碱性物质得到中和,获得pH6.0~7.6间的一系列稳定pH值;另外,加入不溶性CaCO3可以不断中和由于微生物代谢产生的有机酸。
MEM培养基(Minimum Essential Medium)是动物细胞培养中的常用的培养基,主要是贴壁细胞的培养,修改配方后也可用于其他类型细胞培养,例如如无钙(Ca)MEM培养基可被用于悬浮细胞的培养,而Hank’s平衡盐的MEM培养基可被用于二倍体细胞的培养。
硅酸盐细菌培养基是分离培养基配方:蔗糖5g,Na2HPO4 2g,MgSO4 ·7H2O 0.5g,FeCl3 0.005g,CaCO3 0.1g,铝土矿0.5g,琼脂l0~20g,水1000ml,pH 70~7.5
灭菌时的过高温度常对培养基造成不良影响。如:
1.出现混浊和沉淀(天然培养基成分加热沉淀出大分子多肽聚合物;培养基中Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Sb等阳性离子与培养基中的可溶性磷酸盐共热沉淀)。
2.营养成份破坏或改变(酸度较高时淀粉、庶糖、乳糖或琼脂灭菌过程易水解;pH7.5,0.1MPa灭菌20min,葡萄糖破坏20%,麦芽糖破坏50%,若培养基中有磷酸盐共存,葡萄糖转变成酮糖类物质,培养液由淡黄色变成红褐色,破坏更为严重。
3.pH7.2时培养基中的葡萄糖、蛋白胨、磷酸盐在0.1MPa灭菌15min以上可产生对微生物生长的某种抑制物。
4.高压蒸汽灭菌后培养基pH下降0.1--0.3。
5.高压蒸汽灭菌的过程会增加冷凝水,降低培养基成份浓度。对于前三种不良影响,可采用低压灭菌(如在0.056MPa、30min灭菌葡萄糖溶液),或将培养基几种成份分别灭菌,临 用前无菌混合(如磷酸盐与Ca、Mg、Fe、Zn、Cu等阳性离子溶液)的方法,特殊情况可采用间歇灭菌、过滤除菌(如维生素溶液)。工业发酵中采用的连续加压灭菌法(135--140摄氏度,5--15s)和连续蒸煮法。
1.发酵法 日本Shoko (1986)专利报道,用链球菌或微生物提取的酶,从结合型胆汁酸制取游离牛磺酸,将来源于牛肉的链球菌在含有1.5kg牛胆汁提取物和葡萄糖的培养基中37℃培养两天,可以产45g牛磺酸。据Nakanishi(1998)报道,将一株谷氨酸律状杆菌在含有葡萄糖、蛋白陈、KH2PO4、K2HPO4、MgSO4、生物素、酵母膏、尿素和 VB1的培养基中 28℃摇瓶发酵 24h,然后在含有糖浆、酵母膏、KH2PO4、MgSO4、CaCO3、VBl的培养基中28℃发酵4天,最后牛磺酸产量为870mg/k
2.二氯乙烷法 以二氯乙烷为原料,用磺化。氨化、酸化三步合成。
3.乙醇胺法 丁学杰( 1991)用氯化、磺化两步进行。先在盐酸中滴加乙醇胺,然后加入氯化氢于一氯乙胶晶体,收率为76.5%,再在亚硫酸钠溶液中滴加氯化氢乃一氯乙胺晶体溶液,然后浓缩。用乙醇结晶,精制,收率为63%,两步制备牛磺酸的总收率为47.9%,纯度为98.8%。
4.乙撑亚胺法 用乙撑亚胺和亚硫酸直接反应,一步合成牛磺酸,反应温和,纯度为99.4%,产率达 88.9%。
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