6上样缓冲液各成分作用(6×上样缓冲液成分)

6×上样缓冲液成分

电泳缓冲液是Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样缓冲液是SDS缓冲液，需要加入Tris-Hcl，DTT，SDS，溴酚蓝和甘油。

分离胶配制过程中的缓冲液是PH8.8的Tris-Hcl。

浓缩胶配制过程中的缓冲液是PH6.8的Tris-Hcl。电泳缓冲液是加入电泳槽的，tris、甘氨酸缓冲液。

样品缓冲液就是loading buffer，处理蛋白样品的，分离胶缓冲液是配制分离胶的tris-hcl ph8.8。

5×上样缓冲液

4×和5×的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。4×上样缓冲液使用方法：

1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例（4倍稀释）来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。

2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。

3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。5×上样缓冲液使用方法：1.在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液（5X）。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。2.按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液（5X）的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液（5X）。3.100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。4.冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。5.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

上样缓冲液的主要成分和作用

4×和5×的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。

4×上样缓冲液使用方法：

1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。

2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。

3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。5×上样缓冲液使用方法： 1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。2. 按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。3. 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。4. 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

4×sds上样缓冲液

这个倍数是指你的缓冲液母液相比上样时最终浓度的倍数。母液总是要比你的最终浓度高，因为它会被你的蛋白质样品稀释。所以2X就是2倍的母液，与同体积的蛋白质样品混合以后上样。

实际操作上，当然不是根据缓冲液体积来确定样本体积，而是看样本有多少，然后加相应分量的上样缓冲液。2倍的缓冲液就加样本同等体积，5倍的就加样本1/4体积。

2×sds上样缓冲液

4×和5×的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。

4×上样缓冲液使用方法：

1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例（4倍稀释）来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。

2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。

3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。

5×上样缓冲液使用方法：

1.在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液（5X）。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。

2.按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液（5X）的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液（5X）。

3.100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。

4.冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。

5.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

请解释6×载样缓冲液中各成分的作用

1。称量氨基丁三醇 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中；

2。向烧杯中加入约600ml去离子水，充分搅拌均匀；

3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；

4。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。

使用时稀释50倍 即1×TAE Buffer

10×TBE Buffer配制方法：

1。称量氨基丁三醇 108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g 于1L烧杯中；

2。加入约700ml去离子水，搅拌均匀；

3。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。