ecm通用名称:内皮细胞培养基
英文名称:Endothelial Cell Medium (ECM)
内皮细胞培养基描述:
内皮细胞培养基是专门为正常人类微血管内皮细胞体外培养设计的适于其生长的完全培养基。是经灭菌的液体培养基,包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质和低浓度胎牛血清(5%)。该培养基缓冲体系为重碳酸盐,在含5%CO2的细胞培养箱中平衡后pH值为7.4。该培养基的配方能够选择性的促进正常人类微血管内皮细胞体外培养中的增殖和生长,并为其达到理想营养平衡状态提供数量上和质量上的保证。 内皮细胞培养基包含500ml基础培养基,25ml胎牛血清(FBS,目录编号0025),5ml内皮细胞生长添加物(ECGS,目录编号1052),和5 ml青霉素/链霉素溶液(P/S,目录编号0503)
可以从菌落的菌落的形态、排列方式等方面描述。
菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。
每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。不同种或同种在不同的培养条件下,菌落特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴定有一定意义。
菌落(colony)是由单个细菌(或其他微生物)细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度,形成肉眼可见的子细胞群落。
常见菌落特征比较总结:
菌落特征比较:
细菌:湿润,粘稠,易挑起 放线菌:干燥,多皱,难挑起,菌落较小,多有色素 酵母菌:湿润,粘稠,易挑起,表面光华,比细菌的菌落大而厚 霉菌:菌丝细长,菌落疏松,成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状, 无固定大小,多有光泽,不易挑起
菌的特征:
细菌:一般形成较小的圆形菌落,颜色有白色、黄色等,表面光滑或不光滑
放线菌:菌落背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。
酵母菌:菌落为淡黄色,光滑,半透明,比细菌菌落大。
霉菌:菌落大型,肉眼可见许多毛状物,棕色、青色等,可见黑色的分生孢子群。
包括碳源、氮源、无机盐、水和生长因子等化学成分。
微生物培养基的类型
由于各种所需要的营养不同,所以培养基的种类很多.据估计目前约有数千种不同的培养基,这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型.
1.按照培养基的成分来分
培养基按其所含成分,可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类.
(1)合成培养基.合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质.这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,但价格较贵,而且微生物在这类培养基中生长较慢.如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等.
(2)天然培养基.由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌.这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,所以常被采用.
(3)半合成培养基.在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基.这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要.
2.按照培养基的物理状态分
培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类.
(1)固体培养基.是在培养基中加入凝固剂,有琼脂、明胶、硅胶等.固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面.
(2)液体培养基.液体培养基中不加任何凝固剂.这种培养基的成分均匀,微生物能充分接触和利用培养基中的养料,适于作生理等研究,由于发酵率高,操作方便,也常用于发酵工业.
(3)半固体培养基.是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态.可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面.
3.按照微生物的种类分
培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类.
常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基;常用的放线菌培养基为高氏1号培养基;常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基;常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)琼脂培养基和察氏培养基等.
4.按照培养基用途分
培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基.
(1)加富培养基.是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液,用以培养要求比较苛刻的某些微生物.
(2)选择性培养基.是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基.利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来.
(3)鉴别培养基.是在培养基中加入某种试剂或化学药品,使培养后会发生某种变化,从而区别不同类型的微生物.
说明一下培养基是固体还是液体,培养基的颜色,培养基的澄清度,主要成分及适宜生长的微生物。
单个(或聚集在一起的)微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长,繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的,有一定形态结构的子细胞生长群体。
1、根据微生物种类不同分为:好氧性发酵和厌氧性发酵。
2、根据培养基状态不同分为:固体发酵和液体发酵。
3、根据发酵设备分:敞口发酵、密闭发酵、浅盘发酵、深层发酵。
培养基都含有这几部分:碳源(提供碳,可以是碳酸盐)、氮源(提供氮)、无机盐(包括微量元素)、水、凝固剂(凝固作用。不一定会添加,取决于你想使培养基凝固到什么程度,一般使用琼脂)。但对于不同种类微生物的培养这些成分、配比是不同的。有的培养基还含有特殊成分,如抗菌素、色素、激素和血清。总之就是碳源氮源无机盐提供微生物所需营养,凝固剂制造适宜的生存环境,特殊添加成分满足该微生物的特殊需求。
配制要根据你所要培养的微生物进行配制,每种微生物都不同,你需要去详细查资料。
合成培养基是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的,其所含的成分(包括微量元素在内)以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究.在理论上,合成培养基给人类的贡献不仅仅在生物应用上,连生活的细节也有。
2 仪器与用具
2.1 恒温培养箱,高压灭菌器应检定合格,且在使用有效期内。
2.2 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA),配制详见《培养基配制操作规程》(SOP-QC-0060)。
2.3 培养皿φ55mm。
2.4 一次性医用棉签、生理盐水、三角瓶、灭菌剪刀
3 测试条件
3.1 如使用自制培养基平板,在测定前培养皿表面必须严格消毒。
3.2 如使用市售预制平板,则每进入一级洁净区,即脱掉一层包装袋,测试所用培养皿最终以无菌状态进入所测定区域。
3.3 测定状态分为静态和动态,静态测试时室内测定人员一般不超过2人,测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
3.4 对单向流测定应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min之后开始;对非单向流测定应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min之后开始。
4 表面微生物测试点选择及测试频度
4.1 采样点数目及其布置应根据以下几个方便设置:
空调系统初始验证的结果;房间(或区域)的大小和布局;房间(或区域)的用途;与暴露产品的距离;人流物流方向;设备、管理等的复杂程度;易受污染的部位等;
应考虑包含以下部位:每扇门、每个门把手、地板(至少两点)、墙壁(不易被清洁、消毒的部位,至少两点)、公共介质的管路(不易被清洁、消毒部位)、生产设备的关键性部位(如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带)等。
操作人员人体表面采样点应考虑以下部位:双手手指及掌内侧、双手前臂、前胸或腹、眼镜、前额、口罩等处。
根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度,通常将表面分为三类:关键表面(产品、容器及密封件的表面)、一般表面(如设备的外表面、墙壁等)和地面,并且分别设定不同的微生物限度要求。
4.2 采样次数
一般来说,对于同一洁净区或区域,每个相同的取样物体应在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点,地面2个采样点,洁净区主要设备2个采样点等。
表面微生物的每点采样点面积宜控制在25cm2左右。
4.3 测试频度
洁净区表面微生物测试的频率见表1。
表1 测试频率
4.4 日常监测采样点和频度见 洁净室(区)环境监测管理规程(SOP-QC-0095 01)。
5 测试方法
5.1 接触平皿法
5.1.1 接触平皿法适用于平整表面。
5.1.2采样前仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
5.1.3 在培养皿上盖标记测定项目、测定点,日期等信息。
5.1.4 表面附着菌
5.1.4.1 打开接触板碟盖,让培养基表面与取样面直接接触,均匀按压接触板底板,确保培养基表面与取样点表面充分接触不少于10秒,再盖上碟盖。
5.1.4.2 取样后,立即用75%乙醇擦拭取样表面。
5.1.5 手套附着菌
5.1.5.1 打开接触板碟盖,操作者并拢五指,将双手指面与培养基表面均匀充分接触不少于10秒,再盖上碟盖。
5.1.6 取样后的接触板置于培养箱中,先30~35℃培养不少于3天,再20~25℃培养不少于2天。
5.2 棉签擦拭法
5.2.1 棉签擦拭法适用于非平整表面。
5.2.2 取100ml生理盐水放入250ml三角瓶中作为浸出液,取300ml生理盐水放入500ml三角瓶中作为洗净液,取400ml生理盐水放入500ml三角瓶中作为空白液,121℃15分钟灭菌。
5.2.3 在三角瓶上标记测定点、日期等信息。
5.2.4 取出一次性棉签,握住棉签柄,用浸出液浸湿棉头,以约30度角与取样表面接触,擦拭面积为5cm×5cm,缓慢纵横交互擦拭3遍。
5.2.5 擦拭完毕,用已灭菌剪刀剪断棉签,棉头装入100ml浸出液的三角瓶内,手持一端废弃。
5.2.6 取样后,立即用75%乙醇擦拭取样表面。
5.2.7 将上述取样后的三角瓶振摇2分钟,每分钟振摇120次,在超净工作台内通过过滤装置,将100ml浸出液全部过滤。浸出液过滤完毕,用洗净液300ml分三次冲洗过滤器,将过滤后的滤膜放入培养基平板内。用400ml空白液进行过滤,做为空白。
5.2.8 将样品培养基平板和空白样培养基平板倒置在培养箱中,先30~35℃培养不少于3天,再20~25℃培养不少于2天。
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