a.观察细胞显微结构的光学显微镜技术; b.探索细胞超微结构的电子显微镜技术; c.研究蛋白质和核酸等生物大分子结构的X射线衍射技术; d.用于分离细胞内不同大小细胞器的离心技术; e.用于培养具有新性状细胞的细胞融合和杂交技术; f.使机体细胞能在体外长期生长繁殖的细胞培养技术; g.能对不同类型细胞进行分类并测其体积、DNA含量等数据的流式细胞术; h.利用放射性同位素对细胞中的DNA、RNA或蛋白质进行定位的放射自显影技术; i.用于探测基因组中英雄模范种基因是否存在,是否表达以及拷贝数多少的核酸分子杂交技术; j.能将细胞中的特定蛋白质或梳酸分子进行分离纯化的层析技术和电泳技术; k.对细胞化学定性、定量分析的显微分光光度术,显微荧光光度术,核磁共振技术。
动物细胞贴壁培养的方法有组织块培养法和消化培养法。贴壁细胞培养方法操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 实验要点及说明:1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。贴壁培养的优点:容易更换培养液;细胞紧密黏附于固相表面,可直接倾去旧培养液,清洗后直接加入新培养液。容易采用灌注培养,从而达到提高细胞密度的目的;因细胞固定表面,不需过滤系统。当细胞贴壁于生长基质时,很多细胞将更有效的表达一种产品。同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例。适用于所有类型细胞。 贴壁培养的缺点:与悬浮培养法相比扩大培养比较困难,投资大;占地面积大;不能有效监测细胞的生长;
植物细胞培养是在离体条件下,将愈伤组织或其他易分散的组织置于 液体培养基中进行震荡培养,得到分散成游离 的悬浮细胞,通过继代培养使 细胞增殖,从而获得大量细胞群体的一种技术。
二者目的不同,细胞培养是为了得到细胞群体,组织培养是为了得到植株或高度分化的愈伤组织。
病毒的培养方法有动物接种、鸡胚培养、组织培养、细胞培养。
1、动物接种:病毒经注射、口服等途径进入易感动物的体内后可大量增殖,并使动物产生特定的反应。优点:操作方面易行。缺点:受机体免疫力的影响,常需要用无菌动物。疫苗和抗血清的生产。
2、鸡胚培养:一般用9-12日龄的鸡胚,分别接种于卵黄囊内,羊膜腔,尿囊腔等部位。用于病毒分离与疫苗生产。
3、组织培养:在离体活细胞上培养病毒的方法,组织块培养:取组织片进行培养。细胞培养:病毒感染细胞后,大多数引起细胞病变,称为病毒的致细胞病变作用。表现为细胞变形,胞浆内出现颗粒化,核浓缩、核裂解等。
4、采用该病毒所寄生的细胞的全素培养基来培养该细胞,培养一段时间后放进特定的病毒就可以培养了,注意,若细胞是动物细胞时培养基要加入血清。
1、诱变育种。是指利用人工诱变的方法获得生物新品种的育种方法。
2、杂交育种。是指利用具有不同基因组成的同种(或不同种)生物个体进行杂交,获得所需要的表现型类型的育种方法。
3、单倍体育种。是利用花药离体培养技术获得单倍体植株,再诱导其染色体加倍,从而获得所需要的纯系植株的育种方法。
4、多倍体育种。原理:染色体变异(染色体加倍)
5、细胞工程育种。是指用细胞融合的方法获得杂种细胞,利用细胞的全能性,用组织培养的方法培育杂种植株的方法。
6、基因工程育种。物质基础是:所有生物的DNA均由四种脱氧核苷酸组成。其结构基础是:所有生物的DNA均为双螺旋结构。
ES细胞的分离方法: A: 免疫学方法 利用ES细胞所具有的特殊标记,借助荧光细胞分离器从单细胞悬液分离ES细胞。
B:免疫外科学方法 利用囊胚腔对抗体的不通透性,通过抗体与补体结合后所产生的对其它细胞的毒性杀伤作用,除去滋养层细胞,保留ES细胞。C:组织培养法 胚胎用外源激素处理后,所分化出的胚泡进行体外培养,其中的ES细胞垂直向上生长,呈卵圆柱状,可显微镜下检出另培养。D:显微外科学法 用显微操作系统直接从胚泡中吸取ES细胞。
1)血清:动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子,如激素、微量元素、矿物质和脂肪。有一天人们真正学会了配制和血清一样的培养液,那时血清才可被取代。在这里,血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。 (2)支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃, 高速冷冻离心机塑料等作为支持物。 (3)气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节,不断维持所需要的气体条件,每一次开箱操作后的快速恢复对设备的要求可想而知有多难,由此决定了动物细胞离体培养设备要求高、投资大。 植物细胞培养的特殊条件 (1)光照:离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格,因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关,而且与细胞分化有关,例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用,所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中,光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质,如药物的过程,植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。 (2)激素:植物细胞的分裂和生长特别需要植物激素的调节,促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是最基本的激素。植物细胞的分裂,生长,分化和个体生长周期都有相应的激素参与调节。和动物细胞相比,植物细胞离体培养对激素要求的原理已经了解,其应用技术也已相当成熟,已经有一套广泛作为商品使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、激素、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),形成分散的单个细胞,将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外,原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大以后,科学家接着进行传代培养,即将原代培养细胞分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法,从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质。培养条件:
1、无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2、营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)。
3、血清和血浆 。(提供细胞生长必须的营养成份)4、温度和pH。(36.5±0.5℃,7.2~7.4)5、气体环境。(95%的空气+5%CO₂的混合气体)扩展资料:动物细胞有细胞核、细胞质和细胞膜,没有细胞壁,液泡不明显,含有溶酶体,动物细胞的结构有细胞膜、细胞质、细胞器、细胞核;它们的主要作用是控制细胞的进出、进行物质转换、生命活动的主要场所、控制细胞的生命活动。细胞内部有细胞器:细胞核,双层膜,包含有由DNA和蛋白质构成的染色体。内质网分为粗面的与滑面的,粗面内质网表面附有核糖体,参与蛋白质的合成和加工;光面内质网,表面没有核糖体,参与脂类合成。植物细胞与动物细胞区别:1、培养基不同:植物细胞(固体培养基),动物细胞(液体培养基)。2、培养基的成分不同:动物细胞培养必须利用动物血清,植物组织培养则不需要,而需要加入植物生长素。3、产物不同:植物组织培养最后一般得到新的植物个体,而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性,因此得到的是只含同一种的细胞的一个细胞系(或者叫细胞群)。
4、原理不同:植物组织培养的原理为植物细胞的全能性,动物细胞培养的原理为细胞的增殖分化。
5、过程不同:植物组织培养的过程为脱分化和再分化,动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养。
基因工程是在基因水平上技术,而细胞工程是在细胞水平上的技术。
基因工程:
定义1:狭义的基因工程仅指用体外重组DNA技术去获得新的重组基因;广义的基因工程则指按人们意愿设计,通过改造基因或基因组而改变生物的遗传特性.如用重组DNA技术,将外源基因转入大肠杆菌中表达,使大肠杆菌能够生产人所需要的产品;将外源基因转入动物,构建具有新遗传特性的转基因动物;用基因敲除手段,获得有遗传缺陷的动物等.
定义2:将在体外进行修饰、改造的脱氧核糖核酸分子导入受体细胞中进行复制和表达的技术.
细胞工程:
定义1:通过细胞融合、核移植、细胞器移植或染色体操作,产生杂种细胞并发育成个体的技术.
定义2:应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤在细胞整体水平或细胞器水平上,遵循细胞的遗传和生理活动规律,有目的地制造细胞产品的一门生物技术.
免疫细胞制备技术是指细胞培养技术,通过对细胞培养的方式达到对免疫细胞的制备。
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