免疫共沉淀flag作用(免疫共沉淀的作用)
免疫共沉淀的作用
检测目标基因活性在保持组蛋白和DNA联合的同时，染色质被切成很小的片断，通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体，将目标片段（组蛋白发生特异标记的片段）沉淀下来。
IP 是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A”特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法（免疫磁珠结合proteinA，proteinA结合抗体Fc段，抗体结合抗原即发生特异标记的组蛋白，这里要注意组蛋白是和DNA结合的，这样就把目标组蛋白和DNA的符合物沉淀下来了）。
在将组蛋白与DNA分离，用获得的DNA去做western blot ，从而检测那些基因的组蛋白发生了修饰。
检测已知蛋白的靶基因在生理状态下把细胞内的蛋白质和DNA交联在一起，超声波将其打碎为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过所要研究的目的蛋白质特异性抗体沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而明确蛋白与哪些基因相互作用。
目前多用精制的protein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。实验最需要注意点就是抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染能结合未必能用在IP反应。建议仔细检查抗体的说明书。特别是多抗的特异性是问题。
其次，要注意溶解抗原的缓冲液的性质。多数的抗原是细胞构成的蛋白，特别是骨架蛋白，缓冲液必须要使其溶解。为此，必须使用含有强界面活性剂的缓冲液，尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。
另一面，如用弱界面活性剂溶解细胞，就不能充分溶解细胞蛋白。即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果，抗原决定族被封闭，影响与抗体的结合，即使IP成功，也是很多蛋白与抗体共沉的悲惨结果。
再次，为防止蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每抑制剂，低温下进行实验。
每次实验之前，首先考虑抗体/缓冲液的比例。抗体过少就不能检出抗原，过多则就不能沉降在beads上，残存在上清。缓冲剂太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。
免疫共沉淀用途
P=immunoprecipitation 免疫沉淀
IB=immunoblotting 免疫印迹
CO-IP=Co-Immunoprecipitation 免疫共沉淀
免疫沉淀 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集样品中目的蛋白的一种方法。通常使目标蛋白同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以收集，然后通过western blot检测目的蛋白。
免疫共沉淀 是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的蛋白一同随免疫复合物沉淀，可以检测两种目标蛋白质是否在体内存在相互作用，也可以确定一种蛋白在体内的相互作用蛋白。
免疫印迹你可以理解为Western blot一个意思，就是把分离好的蛋白转移到膜上然后用相应的抗体对其进行检测的方法。
如果用免疫共沉淀的蛋白的抗体去检测，那二者结合起来，可以研究体内蛋白质的相互作用
简述免疫共沉淀的概念,原理和优缺点
原理:免疫沉淀-质谱联用IP-MS技术
随着蛋白质组学技术的发展，将免疫亲和与质谱技术结合产生的IP-MS技术则逐渐显示出他的优势。原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体结合的protein-A/G（预先结合固化在琼脂小珠上），形成”结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物，纯化该复合物凝胶电泳分离蛋白，应用质谱分析鉴定靶蛋白的结合蛋白。
应用:免疫共沉淀与质谱结合，不仅能验证已知蛋白的相互作用，而且还可以鉴定与目标蛋白互作的未知蛋白，为科学研究提供全新的实验思路。
免疫共沉淀技术原理
串联亲和纯化（TAP/MS）是免疫共沉淀（Co-IP/MS）的“近亲”，两者在寻找诱饵蛋白的互作蛋白以及纯化互作蛋白的原理方面非常相似。但是TAP/MS经过2步亲和纯化，而Co-IP/MS只有1步亲和纯化，故而TAP/MS可以有效减少非特异蛋白的结合。
基本流程：构建含有目的基因的载体，使目的基因与2个不同的表位标签融合表达，如Flag、HA、His、CBP、SBP等等。采用Flag-HA双标签载体；载体转染细胞并表达融合蛋白“Flag-HA-诱饵蛋白”；细胞裂解提取总蛋白，经anti-flag树脂和anti-HA树脂的两步纯化和洗脱，更大限度了去除了假阳性蛋白。洗脱液进入质谱仪，分析鉴定与诱饵蛋白具有相互作用的蛋白。
免疫共沉淀视频讲解
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是研究蛋白-蛋白间相互作用的经典方法，属于免疫沉淀技术的一类，常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。
免疫共沉淀的设计理念是，假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员，那么利用这种蛋白的特异性抗体，就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉”下来（常说的“pull-down”），进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员。免疫共沉淀的特点可以概括为两点，第一是天然状态，第二是蛋白复合。
什么是免疫共沉淀
IP=immunoprecipitation 免疫沉淀
IB=immunoblotting 免疫印迹
CO-IP=Co-Immunoprecipitation 免疫共沉淀
免疫
沉淀 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集样品中目的蛋白的一种方法。通常使目标蛋白同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以收集，然后通过western blot检测目的蛋白。
免疫共沉淀 是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的蛋白一同随免疫复合物沉淀，可以检测两种目标蛋白质是否在体内存在相互作用，也可以确定一种蛋白在体内的相互作用蛋白。
免疫印迹你可以理解为Western blot一个意思，就是把分离好的蛋白转移到膜上然后用相应的抗体对其进行检测的方法。
如果用免疫共沉淀的蛋白的抗体去检测，那二者结合起来，可以研究体内蛋白质的相互作用
