pcr缓冲液成分作用(pcr缓冲液成分作用有哪些)
pcr缓冲液成分作用有哪些
PCR反应中缓冲液是一个重要的影响因素，特别是其中的Mg2+能影响反应的特异性和扩增片段的产率。目前最为常用的缓冲体系为l0～50mmol／L的Tris—HCl(pH8．2～8．3，20℃)，PCR标准缓冲液含有10mmol／L的Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L的KCl、1．5mmol／L的Mg2+、0.1g／L的明胶。在一般的PCR反应中，1．5～2．0μmol／L Mg2+是比较合适的(对应dNTP浓度为200μmol／L左右)。Mg2+过量能增加非特异扩增并影响产率。
现在认为限制KCl和明胶的用量值得提倡，尤其是BSA，虽其对酶有一定保护性，如果质量不好将起相反的作用，建议使用乙酰化的BSA。KCl在50mmol／L时能促进引物退火，大于此浓度时将会抑制聚合酶的活性。有的反应液以氯化铵或醋酸铵中的NH+才代替K+，其浓度为16．6mmol／L。
在PCR中使用10～50mmol／L Tris HCl，主要靠其调节pH使Taq DNA聚合酶的作用环境维持偏碱性。Tris缓冲液是一种双极化离子缓冲液，pKa为8．3(20℃)，△pKa为一0.021／℃。
在反应体系中加入适量(10％)的二甲基亚砜(DMSO)，虽然DMSO对聚合酶活性有一定抑制作用，但它可减少模板二级结构，提高PCR反应特异性。有报道指出甲酰胺或氯化四甲基铵(TMAC)均可提高反应特异性，而对酶活性没有明显影响。
PCR标准缓冲液对大多数模板DNA及引物都是适用的，但对某一特定模板和引物的组合，标准缓冲液并不一定就是最佳条件，因此各实验室可在此条件上，根据具体扩增项目进行改进。其中Mg2+浓度对扩增作用的特异性和产量有明显影响。Taq酶是一种Mg2+依赖酶，Mg2+浓度一般为1．5mmol／L左右，Mg2+浓度过低时，酶活力明显降低；过高时，酶可催化非特异性扩增。由于反应体系中的DNA模板、引物和dNTP都可能与Mg2+结合，因此降低了Mg2+的实际浓度。所以建议反应中Mg2+用量至少要比dNTP浓度高O．5～1．0mmol／L。
pcr缓冲液的成分与作用
电泳缓冲液的配制方法
1、MOPS
MOPS Buffer，即3-ma啉丙磺酸缓冲液，属于生物缓冲剂，可作为二维凝胶电泳中等电聚焦电泳（IEF）的电解质系统成分；还可应用于Northern杂交，作为RNA的分离和转膜时的缓冲液。
常用的10×MOPS Buffer配制方法如下：
（1）称量41.8 g MOPS，溶解于约700mL DEPC处理水中；
（2）使用2 N NaOH 调节pH值至7.0；
（3）向溶液中加入DEPC处理的1M NaOAC 20mL、0.5M EDTA(pH8.0) 20mL；
（4）定容至1 L，用0.45 μm 滤膜过滤除去杂质，室温避光保存。
2、TAE
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种（TAE和TBE）缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行
电泳。
50×TAE Buffer 配制方法：
1。称量Tris 242g，EDTA 18.612g于1L烧杯中；
2。向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀；
3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；
4。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。
使用时稀释50倍或100倍 即1×TAE Buffer 或 0.5×TAE。
3、TBE
TBE（Trispeng酸），是一种PCR技术中用到的缓冲液。
TBE配方：
1、使用液（0.5×）
0.045mol/L Tris- peng酸 0.001mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，溶液体积为1L。
2、浓贮存液（5×）
54gTris碱 27.5g peng酸 20ml 0.5mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，NaOH调pH至8.0，溶液体积1L。
pcr缓冲液成分作用有哪些原因
PCR中的DNA样本或RNA样本称为底物，加入引物，在探戈酶和缓冲液原料的作用下，经过变性和退火延伸30次左右，然后用琼脂糖电泳检测PCR产物。
pcr缓冲液成分作用有哪些方面
包含PCR 反应缓冲液、SYBR GreenⅠ染料、ROX、dNTPs、Mg2+ AmpErase UNG及GeneCore Taq Gold HS DNA Polymaras的2×混合液
pcr缓冲液相当于细胞内什么成分
需要1 缓冲液（分为含二价Mg和不含的，不含的就还要MgCl2）
2 dNTP
3 引物
4 模板
5 酶
如果你买MIX的话，就只需要MIX，模板pcr需要的原料有：物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液。
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。以及引物。
pcr反应液缓冲液
上样缓冲液中甘油与溴酚蓝的左右分别是① 上样缓冲液中包括甘油,溴酚蓝,SDS等,甘油主要作用是防止样品漂浮出点样孔,溴酚蓝作为电泳指示剂,用来观察电泳进度,SDS用于一些核酸结合蛋白的变性解离.②核酸染料与凝胶中核酸结合,以便于在紫外光下显示核酸条带.
