中水的作用(怎样选择流动相,流动相中水的作用)
怎样选择流动相,流动相中水的作用
在正相色谱中，一般采用极性键合固定相，硅胶表面键合的是极性的有机基团，键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基（-CN）、氨基（-NH2）、二醇基（DIOL）键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂，如烃类溶剂，或其中加入一定量的极性溶剂（如氯仿、醇、乙腈等），以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离极性化合物。一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。组分的分配比K值，随其极性的增加而增大，但随流动相中极性调节剂的极性增大（或浓度增大）而降低。同时，极性键合相的极性越大，组分的保留值越大。
该法主要用于分离异构体，极性不同的化合物，特别是用来分离不同类型的化合物。
反相键合相色谱法
在反相色谱中，一般采用非极性键合固定相，如硅胶-C18H37（简称ODS或C18）硅胶-苯基等，用强极性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。
目前，对于反相色谱的保留机制还没有一致的看法，大致有两种观点：一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。
流动相和水相
一般流动相在上仪器前必须经过两个步骤：减压抽滤和超声减压抽滤有两个目的，一个是过滤掉气体，尤其是有机相和水相混合的时候，会产生大量的气泡。这些气泡进入仪器就会堵住仪器和色谱柱，所以要除掉。
一个是过滤掉不溶性微粒。
你看一般的过滤膜是4.5um孔径的，这个是针对你的色谱柱而定的。色谱柱一般是5um的粒径，保证过滤的流动相里面小的毛絮啊，颗粒啊都不会进入色谱柱。
超声的主要目的也是为了脱气，另外还有助溶和令溶液混合均匀等作用。
不过超声主要是为了去掉溶剂瓶瓶壁和瓶底的气泡，所以没必要超声太久的时间，3-5min足够了。
总而言之，都是为了保护仪器和色谱柱，防止气泡和杂质进入。
水在流动相中的作用
某些物质在酸碱性环境中会更稳定，出峰效果更高。
酸性环境就加醋酸调。碱性就加氨水
流动相有机相和水相配比的关系
没什么特别大的区别，外观一致。实际抽滤一下吧，用一点纯甲醇，水膜瞬间化掉，有机膜完好。如果两个同时抽滤纯水相，水膜过滤速度会快一些。
液相流动相用什么水
当选用最佳流速时，分析时间可能延长可以更好的得到分离效果。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
增加流动相中的水的比例
梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗提。 在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩分析间周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。 梯度洗脱的优点：
1.缩短分析周期；
2.提高分离能力；
3.峰型得到改善，很少拖尾；
4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。 梯度洗脱的原理： 流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。 梯度洗脱特点： 提高柱效改善检测器的灵敏度当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。
流动相水相为什么要新鲜制备
色谱过程的本质是待分离物质分子在固定相和流动相之间分配平衡的过程，不同的物质在两相之间的分配会不同，这使其随流动相运动速度各不相同，随着流动相的运动，混合物中的不同组分在固定相上相互分离。根据物质的分离机制，又可以分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等类别。
吸附色谱
吸附色谱利用固定相吸附中对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离，吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程
分配色谱
分配色谱利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。分配色谱的固定相一般为液相的溶剂，依靠图布、键合、吸附等手段分布于色谱柱或者担体表面。分配色谱过程本质上是组分分子在固定相和流动相之间不断达到溶解平衡的过程。
怎样选择流动相流动相中水的作用
一般一些通用流动相会在水相中加甲酸液质的话利于正离子质子化，维持样品在流动相中的电离状态，甲酸易于挥发另外一般色谱柱在酸性流动相较耐受但是不是固定的，很多复杂分离情况的样品，光加甲酸就不够了。
甲酸一般加0.1%即可，不要超过0.5%酸、碱性成分在色谱分离时，必须保持在单一状态，在分离过程中呈单一性质而出现良好的色谱峰。就是离子抑制作用抑制样品的电离 改善峰型。
怎么选择流动相?流动相中水的作用
1
配制流动相的有机相一般选用色谱纯，纯度更高，不会污染色谱柱，做液质时背景杂质少。水相选择超纯水，或者去离子水。
2
要注意水相一般用棕色试剂瓶盛装，避免长时间放置瓶内长菌。
3
使用抽滤装置，将上述有机相和水相过滤，直到装流动相的试剂瓶中无明显絮状物出现。
4
如果流动相中要加酸或者缓冲盐，按比例配制好流动相后，要使用pH级测试一下流动的pH值，以免pH偏高或偏低损伤色谱柱。
最后，在上液相之前，超声脱气20分钟就可以啦！虽然液相里面由自带的真空脱气机，但为了延长其使用寿命，该步骤还是不可少的。
液相中流动相的作用
影响应该不会太大的。虽然说流速增大，会导致柱压增大，色谱峰的半峰宽变窄。可是同样，保留时间会前移。所以不会有太大的变化。
