葛根提取物，异黄酮的成分功效检测

葛根一般指豆科植物野葛或者甘藤葛的干燥根，甘藤葛也被称为粉葛。而再最新的2015版药典收录的药用葛根为：为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd. )Ohwi的干燥 根。习称野葛。秋 、冬二季采挖，趁鲜切成厚片或小块;干燥。所以今天我们研究的重点对象就是野葛。

葛根提取物葛根黄酮是从野生葛根中提取得到的一种类异黄酮类化合物，主要成分有葛根素、大豆甙元、大豆苷、柒料木素，染料木甙等。其药理作用能改善微循环，扩张冠状动脉，增加脑和冠状动脉血流量，减慢心率，降低心肌耗氧指数而改善缺血心肌的代谢，还具有抗血栓素，提高高密度脂蛋白、抗血管痉挛和降低血小板集聚的作用，临床主要用于治疗酒精中毒、视网膜、动静脉阻塞、突发性聋、心肌梗死、冠心病、心绞痛、高血压、高血脂等病症。

葛根中主要含有异黄酮类化合物，如葛根素大豆素、大豆苷等。葛根素为白色针晶，熔点187℃（分解），易溶于乙醇，冷水微溶6‰热水易溶。大豆苷为无色针晶，熔点239~240℃，易溶于乙醇、热水。

葛根中主要有效成分的提取分离:从葛根中提取分离异黄酮类化合物是根据葛根中的异黄酮类化合物均溶于乙醇，通过醇提将总黄酮提取出来。而葛根总黄酮类化合物结构中没有邻二酚羟基、C3羟基或羧基，只能与碱式醋酸铅产生铅盐沉淀，而部分杂质可能被醋酸铅沉淀，故与杂质分离。再利用各异黄酮化合物极性不同，采用氧化铝柱色谱法分离而得各异黄酮。工艺流程说明:用70％的乙醇回流提取葛根粗粉，使黄酮类化合物溶于乙醇液，然后采用铅盐沉淀法除去醇提液中的杂质，得到纯化的葛根总黄酮类化合物。总黄酮再通过氧化铝柱色谱进行分离。最终得到各种异黄酮。

葛根异黄酮的检测

一、色谱条件

色 谱 柱：Agilent TC-C18 5μm 4.6×250mm

流 动 相：A：水 B：甲醇

流 速：1.0mL/min 检测波长：250nm 灵 敏 度：0.01AUFS

柱 温：35℃ 进 样 量：10μL

梯度条件：

二、溶液制备

标准溶液制备： 精密称取葛根素、大豆甙、染料木甙、大豆甙元各约2至3mg于25mL容量瓶中，加入甲醇溶解定容至刻度。

样品溶液制备： 提取物样品：精密称取葛根提取物样品约10mg于25mL容量瓶中，加入甲醇超声震荡20min后，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤即得。

三、样品测定

在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后，进样测定，用外标法分别计算样品中各成分的含量，结果之和即为葛根异黄酮的含量。

计算公式：葛根异黄酮：X：

式中：

A样 —— 样品中有效成分分别的峰面积

A标—— 对照品图谱中有效成分分别的峰面积。

C标—— 以上有效成分对照品分别的浓度；mg/ml

M —— 样品称样量；mg

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