大部分客户对标准提取物,比例提取物,生粉,这些不是很清楚,他们的标准是什么?检测依据是什么?也不知道该怎么去区别分辨,或者只是一味追求低价,今天针对这方面的问题做个系统的解答。
一般大家所说的 ,植物提取物,标准提取物主要是指在国际标准,检测该植物有效成份(主要成份),比如以葛根为例。
药典上葛根的质量标准是:
葛 根 Gegen PUERARIA E LOBATA E RADI X 本品为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd )Ohwi的干燥 根。习称野葛。秋、冬二季采挖,趁鲜切成厚片或小块;干燥。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各 1ul ,注人液相色请仪,测定,即得。 本品按干燥品计算,含葛根素( C 2 1 H 2 。 0 9 )不得 少 于2.4%。
我们看下不同产地的原料一般葛根素的含量在多少。
(Pl1为 (3’-羟基葛根素(3’-hydroxypuerarin)),pl2为 (葛根素puerarin),pl3为 (3’-甲氧基葛根素(3’-methoxypuerarin),pl4为 (大豆甙元-8-C-芹菜糖基(l→6)-葡萄糖甙[daidzein-8-C-apiosyl(1→6)-glucoside]))
葛根以葛根素为标准,药材的标准含量一般在2.5~3.5%(因产地不同而异),因此浓缩比例均以葛根素含量为指标,如30%葛根素约为原药材9~10倍,而药材的黄酮含量在10%左右(2010药典紫外检测)
而比例提取物; 还是以葛根为例,例如 葛根比例5:1 一般浓缩制剂就是用原药材100㎏浓缩物成为20㎏,即称为浓缩5倍;
一般提取物在浓缩加工时植物成份的损失,例如色素的变化、糖类转化…等,均容易改变其颜色,当然味道也因挥发油及脂溶性成份之损失而有所改变。因此利用主要成份之检测,来判断浓缩后成份的标准才是合理的,颜色、香味都可以用人工合成物质(色素、甘味剂),来混淆判断。
但是比例提取物主要检测是通过TLC ,这种方法,鉴别药材真伪,TLC常用的对照是对照药材(国内用的产自中检所)用于区分产品是否来源于某种药材(植物)其常用于比例提取物,考察其来源追溯。不过对于具体含量的检测指标缺乏标准。
然后我们系统梳理下一般植物提取物的检测方法有哪些,他们之前的区别和对应的检测方向
目前,应用于植物提取物中的常用方法有TLC, HPTLC,UV, HPLC ,GC
1. 薄层色谱(Thin Layer Chromatography,TLC)
又叫薄层层析,也是比例提取物的常用检测方法。可以快速分离和定性分析少量物质、简便的一种很重要的分析方法。其操作步骤是指以适宜的固定相涂于玻璃板、塑料板或铝基片上制成薄层板,把要分析或分离的样品点在薄层板上,放在密闭槽中,加入适宜溶剂作为流动相展开,由于毛细管作用,溶剂被吸上,沿板移动而流过试样点,试样点中的各组分被溶剂带动向前移动,由于各组分物理化学性质不同,与吸附的作用不同,因此移动的距离也不相同,跑到一定距离之后,各组分即可互相分开,再用显色剂显色。
2.HPTLC与TLC的区别,他们就只有硅胶板的板材材质不一样
HPTLC硅胶板细一点,其分离能力相对强些 所以客户提到他们用HPTLC 检测的,最终不影响检测结果。
TLC的优点,也就是我们所关注的重点
薄层色谱技术的优点:薄层图谱以彩色图像呈现,直观、易于辨认;广泛的适用性,至今为多国药典用于植物药的鉴别;多样品在同板同时平行比较;色谱可供多层次分析,制成的摄影可长期保留;可利用不同参数进行多次分析计算,不必重复分离。
鉴别药材真伪,TLC常用的对照是对照药材(国内用的产自中检所)
用于区分产品是否来源于某种药材(植物)
其常用于比例提取物,考察其来源追溯。(因用的是对照药材,可同时鉴别植物药材中的多个组分)
3.紫外UV检测方法
紫外可见分光光度定量分析的依据是Lambert-Beer定律,即在一定波长处被测定物质的吸光度与它的溶度呈线性关系。应此,通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度可求出该物质在溶液中的浓度和含量。
我们常用于检测总黄酮,总皂苷,多糖,多酚,花青素,蛋白质,氨基酸,水溶性碳水化合物的检测这一方法主要是根据客户需求找对方法(如有多种方法),具体参考上次刘总分析多糖的时候,找中不同方法测多糖的区别,给客户分析。
4.液相检测HPLC 方法
接下来我们看HPLC 方法,也是我们应用比较普遍,检测结果也比较权威的方法。
HPLC全程是High Performance Liquid Chromatography(高效液相色谱法),又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法。近年来,在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。
检测方法和客户一致的情况下,只要对照品没啥问题,检测结果差异不会太大 ,不管国内国外客户,客户比较有争议,在检测结果上有分歧的,可考虑SIGMA对照品,比较权威我们常用的HPLC检测器是紫外检测器(UV)和蒸发光检测器(ELSD)
先看紫外检测器 UV-Vis检测器是目前HPLC中应用最广泛的检测器,简称紫外检测器。这种检测器灵敏度高,线性范围宽,对流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱分离。紫外检测器要求被检样品组分在紫外或可见光区有吸收,而使用的流动相无紫外吸收或紫外吸收波长与被检组分紫外吸收波长不同,在被检组分紫外吸收波长处没有吸收。紫外检测器属选择性检测器,同时它是非破坏性检测器,可用于制备色谱。
该法要求必须要在紫外或可见光区有吸收。
而紫外或可见光区无吸收或者末端吸收很弱的怎么办呢 ?
我们会采用ELSD(蒸发光)检测方法
ELSD是一种质量型检测器,它可以用来检测任何不挥发性化合物,包括氨基酸、脂肪酸、糖类、表面活性剂等,尤其对一些较难分析的样品,如磷脂、皂苷、生物碱、甾族化合物等无紫外吸收或紫外末端吸收的化合物更具有其他HPLC检测器无法比拟的优越性这个是其检测的独特性 。
ELSD的通用检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点,不同于紫外和荧光检测器,ELSD的响应不依赖于样品的光学特性,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测,不受其官能团的影响。ELSD的响应值与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度。
5.气液色谱法(英语:Gas chromatography,又称气相层析)
是一种在有机化学中对易于挥发而不发生分解的化合物进行分离与分析的色谱技术。在我们植物提取物中的应用,主要检测溶剂残留,农药残留以及挥发油的检测 。
相信通过以上简单介绍,大家对植物提取物的检测方法有了大概的了解。
而目前比例提取物药食同源,和用于保健品的比例提取物有以下这些。
常规的药食同源比例提取物有:
八角茴香、白芷、白果、白扁豆、白扁豆花、百合、薄荷。
赤小豆。
丁香、刀豆、代代花、淡竹叶、淡豆豉。
阿胶。
佛手、茯苓、蜂蜜、榧子、蝮蛇、覆盆子。
甘草、枸杞子、高良姜、葛根。
花椒、荷叶、黄芥子、黄精、黑芝麻、黑胡椒、槐米、槐花、藿香。
决明子、鸡内金、金银花、姜(生姜、干姜)、桔红、桔梗、菊花、菊苣、橘皮。K昆布。
龙眼肉(桂圆)、罗汉果、莱菔子、莲子。
马齿苋、木瓜、火麻仁、牡蛎、麦芽。
胖大海、蒲公英。
芡实、青果。
肉豆蔻、肉桂。
山药、山楂、沙棘、砂仁、桑叶、桑椹、酸枣仁。
桃仁。
乌梢蛇、乌梅。
小茴香、小蓟、杏仁(甜、苦)、香橼、香薷、鲜白茅根、鲜芦根、薤白Y玉竹、余甘子、郁李仁、鱼腥草、益智仁、薏苡仁。
枣(大枣、酸枣、黑枣)、枳椇子、栀子、紫苏、紫苏籽。
可做保健品类的比例提取物有:
巴戟天、北沙参、白及、白术、白芍、白豆蔻、补骨脂、柏子仁、荜茇、鳖甲。C川牛膝、川贝母、川芎、车前子、车前草、苍术、赤芍、侧柏叶、刺五加、刺玫果。D大蓟、丹参、地骨皮、当归、杜仲、杜仲叶、党参
番泻叶、蜂胶
龟甲、骨碎补、蛤蚧
红花、红景天、怀牛膝、厚朴、厚朴花、胡芦巴、黄芪、湖北贝母、槐实。J金荞麦、金樱子、姜黄、绞股蓝、韭菜子、积雪草、蒺藜。
诃子、苦丁茶。
罗布麻、芦荟。
马鹿胎、马鹿茸、马鹿骨、木香、木贼、牡丹皮、麦门冬、玫瑰花、玫瑰茄、墨旱莲。
女贞子、牛蒡子、牛蒡根。
平贝母、佩兰、蒲黄。
青皮、茜草、
人参、人参叶、人参果。
三七、山茱萸、升麻、生地黄、生何首乌、石决明、石斛(需提供可使用证明)、沙苑子、首乌藤、桑白皮、桑枝、酸角、熟大黄、熟地黄。
土茯苓、天门冬、天麻、太子参、菟丝子。
五加皮、五味子、吴茱萸。
玄参、西洋参、香附。
远志、益母草、淫羊藿、野菊花、银杏叶、越橘。
竹茹、制大黄、制何首乌、泽兰、泽泻、知母、枳壳、枳实、珍珠、浙贝母
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